Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 13 Nomor 1 Februari 2015 POTENSI EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona squamosal L.
) SEBAGAI
ANTIFERTILITAS PADA TIKUS PUTIH BETINA GALUR WISTAR
Nur Laili Dwi Hidayati.
Rizki Kristianti, dan Ganjar Taufik P.
Prodi S1 Farmasi STIKes Bakti Tunas Husada Tasikmalaya Jl.
Cilolohan No.
36 Tasikmalaya e-mail : nur.
laili81@gmail.
ABSTRAK
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol daun srikaya (Annona squamosa ) sebagai antifertiltas pada tikus putih galur Wistar.
Tikus putih sebanyak 40 ekor umur 2-3 bulan dikelompokkan berdasarkan Rancangan Acak lengkap dengan perlakuan kelompok kontrol negatif, kontrol positif dan 3 dosis uji.
Tikus putih diberikan perlakuan selama 15 hari selanjutnya hewan uji di bedah diambil uterusnya untuk dibuat preparat histologis.
Parameter yang diukur adalah banyaknya fase tiap siklus estrus, berat basah uterus, indeks uterus, diameter uterus dan tebal uterus.
Data dianalisis dengan anova dan dilanjutkan uji LSD.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun srikaya dapat menganggu siklus estrus dengan memperpendek fase estrus.
memperpanjang fase met-estrus.
meningkatkan berat basah uterus, meningkatkan indeks uterus, meningkatkan diameter uterus dan meningkatkan tebal uterus.
Dosis efektif yang memberikan efek antifertilitas adalah 0,038mg/200 gram BB tikus.
Kata kunci : Ekstrak etanol, antifertilitas, daun srikaya (Annona squamosal L.
PENDAHULUAN
Latar Belakang Peggunaan obat antifertilitas bertujuan untuk mengurangi kesuburan dengan cara pertemuan antara sel telur dengan Pengendalian kesuburan pada dasarnya merupakan usaha untuk mencegah kehamilan pada manusia, ada beberapa cara pengendalian kesuburan seperti menunda perkawinan, sistem berkala, penggunaan kondom, penggunaan obat spermisida/pil vagina (Kemenkes, 2.
, kontrasepsi hormonal.
AKDR (Alat Kontrasepsi Dalam Rahi.
dan sterilisasi .
asektomi dan tubektom.
(Wardoyo.
Penggunaan kontrasepsi masih dikeluhkan oleh masyarakat karena dapat memberikan efek Penggunaan pantang berkala yang terlampau lama dapat menimbulkan frustasi serta keakuratannya diragukan.
Penggunaan beresiko terjangkit kanker payudara dan Penggunaan AKDR menimbulkan kejang rahim, nyeri pelvik dan endometriosis.
Sterilisasi merupakan metode kontrasepsi yang sifatnya tetap (Prawirohardjo.
Menurut Kemenkes .
, penggunaan obat antifertilitas/kontrasepsi yang ideal untuk penggunaan massal sebaiknya efektif tanpa resiko kegagalan, mempunyai efek samping sesedikit mungkin, kerjanya reversibel, mudah didapat, harganya terjangkau, mudah penggunaannya dan tidak memerlukan motivasi terus menerus untuk digunakan.
Eksplorasi suatu sumber bahan kontrasepsi dari bahan alami, terutama dari tanaman dapat dijadikan solusi sebagai bahan pengatur fertilitas.
Menurut Nurhuda et al.
, penggunaan bahan obat-obatan dari tanaman memiliki toksisitas rendah, mudah diperoleh, menimbulkan efek samping.
Berbagai senyawa bioaktif pada tumbuhan, khususnya kelompok senyawa-senyawa steroid, alkaloid, isoflavonoid, triterpenoid dan xanthon memiliki khasiat sebagai bahan pengatur fertilitas.
Menurut Adnan .
dan Kemenkes .
, pengaruh antigonadotropin, mengganggu oogenesis pertemuan ovum dengan spermatozoa, menghambat implantasi (Sabri,2.
, meningkatkan persentase kehilangan gestasi (Sabri, 2.
, dan mereduksi jumlah anak sekelahiran (Sabri, 2007.
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 13 Nomor 1 Februari 2015 Rinidar dan M.
Isa, 2007.
Siburian dan Rosa, 2.
Metode yang dapat diterapkan untuk mengevaluasi daya kerja obat antifertilitas khususnya yang bekerja secara hormonal pada wanita yaitu melalui pemantauan kadar darah hormon kelamin yakni hormon estrogen dan progesteron.
Kinerja mempengaruhi siklus reproduksi baik menstrusi/estrus (Sari dan Nunung, 2004.
Hidayati dan Tita, 2014.
Priatna et al.
, uterus/endometrium (Sari dan Nunung, 2004.
Agustini et al.
, 2005.
Puspitadewi dan Sunarno, 2007.
Kusmara et al.
, 2007.
Soegiarso dan Endang, 2008.
Hidayati dan Tita, 2013.
Priatna et al.
, oogenesis maupun ovulasi.
Berdasarkan empiris di masyarakat, daun srikaya dapat digunakan sebagai astringen, antiradang, antelmentik, zat pemicu pematangan bisul, antitumor dan (Djajanegara dan Prio, 2.
Daun (Annona mengandung senyawa flavanoid, fenolik, saponin, triterpenoid, steroid, alkaloid dan kumarin (Meri et al.
, 2.
Senyawa Efek negatif dari saponin pada reproduksi hewan diketahui sebagai abortivum, menghambat pembentukan zigot dan antiimplantasi (De Padua,1987 dalam Rusmiati, 2.
Pengkajan zat aktif yang terdapat pada daun Srikaya melalui skrining fitokimia dan pengujian terhadap hewan antifertilitas dengan mengevaluasi siklus estrus, efek estrogenik perlu dilakukan.
Keteraturan fase siklus estrus dievaluasi dengan melihat keberadaan sel-sel epitel, sel epitel terkornifikasi, dan leukosit pada vagina dengan melakukan apus vagina (Turner dan Bagnara 1976.
Marcondes et , 2002.
Grenblatt, 1966 dalam Sari dan Nunung, 2.
Adanya efek estrogenik dievaluasi dengan penimbangan bobot uterus, penebalan uterus dan endometrium (SaAoroni dan Bambang, 2002.
May, 1971 dalam Sari dan Nunung, 2004.
Puspitadewi dan Sunarno, 2007.
Agustini et al.
, 2.
Perumusan Masalah Berdasarkan latar belakang penelitian, dapat dirumuskan masalah sebagai Apakah pemberian ekstrak etanol
daun Srikaya dapat menganggu siklus
estrus pada Tikus Putih betina? Apakah pemberian ekstrak etanol
daun Srikaya dapat menimbulkan efek
estrogenik pada Tikus Putih betina ? Berapakah dosis ekstrak etanol
daun Srikaya yang paling efektif sebagai TUJUAN DAN MANFAAT
PENELITIAN
Tujuan Penelitian Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek antifertilitas ekstrak etanol daun Srikaya pada tikus putih betina yang dapat diperoleh dari hasil evaluasi berupa terganggunya siklus adanya efek estrogenik yang ditandai dengan peningkatan bobot uterus, diameter uterus dan tebal endometrium.
Manfaat Penelitian Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan kontribusi untuk dapat digunakan sebagai bahan baku kontrasepsi yang lebih aman bagi kesehatan.
METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Penelitian Alat yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya yaitu timbangan analitik, gelas kimia, gelas ukur, pipet tetes, tabung reaksi, rak tabung, blander, mortir, stamper, kertas saring, kain flanel, cotton bud, gelas objek, mikroskop, sonde perangkat kandang tikus, timbangan tikus, kapas, rotary evaporator, dan kamera Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu daun srikaya (Annona squamosa L), tikus putih (Rattus norvegicu.
betina galur Wistar, etinil estradiol, metilen biru.
NaCl 0,9%, air suling, larutan PGA 1 %, pereaksi Dragendorff.
LiebermanBurchard.
Mayer ,serbuk Mg.
HCl 2 N, amilalkohol, etanol 70%, eter, gelatin 1 %, vanilin 10%, asam sulfat pekat.
KOH 5%, amonia, kloroform, metanol, asam asetat anhidrat, paraffin, pereaksi Dragendorff.
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 13 Nomor 1 Februari 2015 pereaksi Lieberman-Burchard, pereaksi Mayer, pewarna Haematoksilin-Eosin dan larutan besi .
Rancangan Penelitian Penelitian rancangan acak lengkap (RAL) dengan 5 kelompok perlakuan yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif dan 3 kelompok dosis uji.
Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih betina galur Wistar dengan jumlah 40 ekor.
Prosedur Penelitian Determinasi Bahan baku yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun srikaya (Annona squamosa L.
) yang Dusun Gudang.
Kecamatan Hegarsari Pataruman.
Kota Banjar.
Jawa Barat.
Bahan baku kemudian dipastikan identitasnya di Herbarium Sekolah Ilmu Teknologi Hayati.
Institut Teknologi Bandung.
Identifikasi dan Adaptasi Hewan Uji Hewan uji diidentifikasi di Dinas Pertanian dan Ketahanan Pangan Kota Bandung.
Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih betina dewasa dara galus Wistar berusia 2-3 bulan dengan berat 150-200 gram.
Pembuatan Simplisia Daun srikaya segar dibersihkan terlebih dahulu dari kotoran yang menempel, kemudian dicuci, kemudian dikeringkan di bawah sinar matahari setelah itu dilakukan sortasi.
Daun yang sudah dinyatakan bersih dipotong kecil-kecil kemudian dihaluskan hingga diperoleh serbuk daun srikaya.
Serbuk tersebut selanjutnya disimpan pada tempat kering dalam wadah tertutup rapat (Depkes, 1.
Pembuatan Ekstrak Serbuk daun srikaya sebanyak 500 gram diekstraksi dengan cara maserasi dengan pelarut etanol 96% (Harbone.
Skrining Fitokimia (Franswoth, 1.
: alkaloid, flavonoid, steroid, monoterpenoid, seskuiterpenoid.
Pemberian perlakuan pada Tikus Betina Tikus putih betina sebanyak 35 ekor dibagi menjadi 5 kelompok perlakuan yang diberi makan dan minum, masingmasing perlakuan sebanyak 7 ekor tikus dengan perlakuan seperti yang tertera pada Tabel 3.
Tabel 3.
Perlakuan, sediaan yang diberikan dan jumlah yang diberikan tiap kelompok uji Perlakuan Kontrol negatif Kontrol positif Dosis uji I Dosis uji II Dosis uji i Sediaan yang diberikan Suspensi PGA 1% Suspemsi etinil estradiol .
,8 mg/200 BB tiku.
dalam PGA 1 % Ekstrak daun srikaya .
,0095 g/200 g BB tiku.
dalam PGA 1% Ekstrak daun srikaya .
,019 g/200 g BB tiku.
dalam PGA 1 % Ekstrak daun srikaya .
,038 g/200 g BB tiku.
dalam PGA 1% Pemeriksaan Ulas Vagina Pengambilan Sampel Ulas Vagina Ulas vagina dilakukan dengan cara mengoleskan cotton bud yang telah dibasahi NaCl fisiologis 0,9% diusapkan secara perlahan pada dinding vagina tikus sudut C 45A dan diulas sebanyak 1-2 kali Hasil ulasan dioleskan ke gelas objek yang sebelumnya telah dibersihkan dengan alkohol 70%.
Gelas objek dibiarkan beberapa menit agar ulasan mengering, kemudian dilakukan fiksasi dalam metanol selama C 2 menit agar selsel melekat pada gelas objek.
Sediaan dimasukan ke dalam larutan metilen biru selama 25 menit lalu dibilas dengan menggunakan air mengalir perlahan beberapa detik, kemudian preparat ulas vagina diamati di bawah mikroskop .
(Marcondes et al.
, 2.
Pengamatan Siklus Estrus Sediaan ulas vagina ditentukan fase siklus estrusnya melalui identifikasi sel epitel, sel epitel terkornifikai .
dan leukosit (Ward et al.
, 2.
Fase proestrus didominasi oleh sel epitel Fase metestrus didominasi oleh sel tanduk dan leukosit.
Fase diestrus yang paling dominan terlihat adalah sel leukosit (Marcondes et al.
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 13 Nomor 1 Februari 2015 II.
HASIL DAN PEMBAHASAN
SKRINING FITOKIMIA
Berdasarkan hasil penelitian skrining fitokimia ekstrak etanol daun srikaya mengandung senyawa flavonoid, steroid, saponin, kuinon.
SIKLUS ESTRUS
Fase Proestrus Rata-rata munculnya fase metestrus .
Munculnya menunjukkan hasil yang berbeda seperti yang tertera pada Gambar 4.
Kontrol - Kontrol Dosis 1 Dosis 2 Dosis 3 Perlakuan Berdasarkan uji anova menunjukan Hal menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun srikaya belum dapat menghambat munculnya fase proestrus rata-rata munculnya fase proestrus.
Fase Estrus Rata-rata munculnya fase estrus menunjukan hasil yang berbeda antar perlakuan seperti yang tertera Gambar Rata-rata munculnya fase estrus .
Bobot Uterus dan Indeks Organ Tikus putih betina dikorbankan dengan cara dislokasi leher, kemudian dilakukan pembedahan (Kemenkes, 1.
Uterus dan ovarium tikus dikeluarkan segera, semua isi uterus dibersihkan dengan NaCl Indeks organ dihitung :
yaAycuycaycuyc ycOycyceycycyc Indeks organ = x 100% yaAycuycaycuyc ycNycycayc Ea (Angelina et al, 2.
Pembuatan Preparat Histologi Uterus Tikus Putih Betina Uterus tikus putih betina dibuat preparat histologis dengan metode paraffin serta pewarnaan menggunakan larutan MayerAos Hematoxylin-Eosin (HE).
Tahapan menggunakan metode paraffin meliputi fiksasi, pencucian, dehidrasi, penjernihan (Clearin.
, infiltrasi paraffin, penanaman .
, pengirisan .
, .
, .
, .
, pemberian label .
(Mujimin.
Abdel Warith et al.
, 2.
Pengamatan hasil preparat histologis Diameter uterus dan tebal endometrium diukur menggunakan micrometer okuler yang telah dikalibrasi terlebih dahulu dengan micrometer objektifnya.
Pengolahan dan Analisis Data Data berupa fase siklus estrus, indeks uterus dianalisis secara deskriptif.
Lama siklus estrus, bobot uterus, diameter uterus, tebal endometrium dihitung ratarata dan standar deviasinya dianalisis secara statistik meliputi uji Normalitas.
Homogenitas.
ANOVA dan uji LSD.
(Priyanto, 2.
Lokasi dan Waktu Penelitian Kegiatan penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakognosi Laboratorium Farmakologi STIKes Bakti Tunas Husada Tasikmalaya dalam jangka waktu 4 bulan.
Kontrol - Kontrol Dosis 1 Dosis 2 Dosis 3 Perlakuan Berdasarkan hasil uji Anova, pada kelompok kontrol positif, dosis I, dosis II dan dosis i memiliki perbedaan yang signifikan terhadap kontrol negatif.
Hasil uji anova menunjukkan bahwa rata-rata munculnya fase estrus pada kontrol positif dibandingan dengan dosis I, dosis II, dosis i tidak signifikan yang berarti pemberian ekstrak etanol daun srikaya memberikan efek yang sama dengan etinil estradiol dalam penghambatan munculnya fase Mekanisme etinl estradiol dalam mengganggu fertilitas dengan adanya mekanisme umpan balik negatif (Feet back negativ.
yang ditandai dengan terhambatnya fase estrus.
Diduga, steroid Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 13 Nomor 1 Februari 2015 Kontrol - Kontrol Dosis 1 Dosis 2 Dosis 3 Perlakuan Rata-rata berat basah uterus .
Kontrol - Rata-rata munculnya fase di-estrus .
Rata-rata munculnya fase met-estrus .
dapat memberikan efek antifertilitas melalui efek umpan balik negatif.
Flavonoid antifertilitas karena sifatnya sebagai fitoestrogen yang melalui efek umpan balik negatif menganggu terbentuknya sel telur (Ovu.
Fase Metestrus Rata-rata munculnya fase metestrus menunjukan hasil yang berbeda antar seperti yang tertera pada Gambar 4.
Kontrol Dosis 1 Perlakuan Dosis 2 Dosis 3 Perlakuan Berdasarkan hasil uji anova, rata-rata munculnya fase estrus pada dosis 1 tidak signifikan, sedangkan dosis 2 dan 3 signifikan terhadap kontrol negatif.
Banyaknya fase metestrus dimungkinkan karena terhambatnya fase estrus sehingga folikel mengalami degenerasi.
Rata-rata munculnya fase estrus pada dosis 1 tidak signifikan, sedangkan dosis 2 dan 3 signifikan terhadap kontrol positif.
Fase Diestrus Rata- rata munculnya fase diestrus seperti yang tertera pada Gambar 4.
Hasil uji anova menunjukkan hasil yang tidak signifikan sehingga dapat diartikan munculnya fase diestrus pada semua kelompok perlakuan adalah sama.
menunjukkan adanya efek estrogenik.
sebagai indikator kinerja antifertilitas.
Peningkatan berat basah uterus pada dosis uji dimungkinkan karena flavonoid yang dapat merangsang pertumbuhan sel estrogenik (Setiawan, 2010.
Akbar, 2010.
Meri et al, 2.
Etinil peningkatan kadar estrogen dalam darah (Nalbandov, 1990 dalam Suswanto, peningkatan aktifitas pembelahan sel uterus sehingga massa uterus semakin Selain itu, etinil estradiol mampu menyebabkan penimbunan cairan pada BERAT BASAH UTERUS .
DIAMETER ENDOMETRIUM UTERUS (AA.
Rata-rata diameter uterus nilainya bervariasi antar perlakuan seperti yang tertera pada Gambar 4.
Berdasarkan hasil uji anova, rata-rata diameter uterus kelompok dosis 1, 2 dan 3 memiliki perbedaan yang signifikan terhadap kontrol negatif.
Rata-rata diameter uterus kelompok dosis uji 1 dan 2 menunjukkan penambahan diameter uterus yang sama dengan kontrol positif, sedangkan dosis 3 memberikan efek yang signifikan lebih efektif daripada kelompok kontrol positif.
Pemberian etinil estradiol
DAN INDEKS UTERUS (%)
Rata-rata berat basah uterus .
dan indeks uterus seperti yang terlihat pada Gambar 4.
dan Gambar 4.
Rata-rata indeks uterus (%) 0,07 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 Rata-rata berat basah uterus dan indeks 0,01 uterus kelompok kontrol positif dan dosis uji 0 lebih tinggi dibandingkan dengan Kontrol Dosis 1 Dosis 2 Dosis 3 kontrolKontrol Menurut Kemenkes Perlakuan Rata-rata diameter endometrium (AA.
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 13 Nomor 1 Februari 2015 meningkatkan diameter uterus dan tebal Dosis uji yang paling efektif adalah dosis 3 0,038 g/200 g BB tikus.
Perlakuan mampu meningkatkan diameter uterus (Suhargo, 2.
Peningkatan diameter uterus pada kelompok dosis uji disebabkan oleh senyawa metabolit sekunder yaitu steroid dan flavonoid (Meri et al.
, 2.
Adanya peningkatan diameter uterus merupakan indikasi adanya efek estrogen yang dapat memberikan efek antifertilitas.
Rata-rata tebal endometrium (AA.
TEBAL ENDOMETRIUM (AA.
Rata-rata tebal endometrium nilainya bervariasi antar perlakuan seperti yang tertera pada Gambar 4.
Perlakuan Rata-rata tebal endometrium pada kelompok kontrol positif dan dosis menunjukan hasil yang lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol negatif secara signifikan karena senyawa steroid proliferasi endometrium dan pergantian sel-sel epitel untuk menutupi permukaan mukosa (Harrison et al, 1999 dalam Primiani 2.
Pemberian ekstrak etanol daun srikaya pada dosis 3 memberikan penambahan tebal endometrium yang paling efektif.
KESIMPULAN DAN SARAN
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun srikaya (Annona squamosal ) memberikan efek antifertilitas dengan cara memperpendek munculnya fase estru, memperlama munculnya fase met-estrus.
SARAN Perlu dilakukan uji toksisitas dosis agar dapat lebih memastikan tingkat keamanan dalam pemakaiannya.
Selain itu perlu juga adanya pengukuran kadar estrogen agar lebih maksimal.
DAFTAR PUSTAKA